所在位置: 首页 > 技术支持 > 技术详情

采用高架十字迷宫实验、旷场实验观察大鼠行为学变化


摘要:目的:基于“病证结合”理论,构建和评价广泛性焦虑(generalized anxiety disorderGAD)心阴亏虚证 大鼠模型。方法:按随机数字表法将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只,即空白组、模型组、天王补心丸组、di西泮片组。根据先ji病后证型的思路进行造模,除空白组外,其余3组大鼠通过不确定性空瓶应激法先建立 GAD模型,再采用水环境小站台睡眠剥夺法形成大鼠心阴亏虚证候模型,以此构建GAD心阴亏虚证模型。造模 成功后,空白组和模型组不给与任何处理,天王补心丸组、di西泮片组分别给予天王补心丸、di西泮片灌胃,1次/ d,连续干预21 d从宏观表征、微观指标、以方验证三个方面对模型进行评价。每日观察大鼠一般情况。造模 前、造模后及干预第1、2、3周末采用高架十字迷宫实验、旷场实验观察大鼠行为学变化。造模前、造模后及干预 第3周末检测大鼠收缩压、心率、呼吸、肛温水平。干预第3周末采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real - time PCR)检测大鼠海马GR mRNA表达水平。结果:(1)宏观表征:①行为学结果显示:与空白组比较,造模后、 造模后1周、造模后2周、造模后3周模型组OE%值、OT%值、水平运动、垂直运动均降低(P <0. 05)。②生命体 征结果显示:与空白组比较,造模后、造模后3周模型组收缩压均较低P<0. 01);心率、呼吸、肛温均较高P< 0.01)(2)微观指标:RT-PCR结果显示:造模后3周,与空白组比较,模型组大鼠海马GR mRNA表达水平降 低(P <0. 01)(3)以方验证:①行为学结果:与模型组比较,天王补心丸组、di西泮片组干预后各时间点OE%值、OT%值、水平运动、垂直运动均升高P<0. 05);di西泮片组干预后各时间点OE%值、干预第1、周末OT%值、水平运动和干预第1、周末垂直运动均升高(P <0. 01)。②生命体征结果:干预第3周末,与模型组比较,天 王补心丸组、di西泮片组收缩压均升高(P <0. 05),心率、呼吸、肛温均降低(P <0. 05)。③RT - PCR结果:干预 第3周末,与模型组比较,天王补心丸组、di西泮片组大鼠海马GR mRNA表达水平均升高(P <0. 05)。结论:采 用不确定性空瓶应激法结合水环境小站台睡眠剥夺法成功构建了 GAD心阴亏虚病证结合模型,该模型较为稳 定,可控性相对较强,值得进一步应用。

关键词:广泛性焦虑;心阴亏虚;病证结合;模型

广泛性焦虑症GAD)是zui常见的焦虑症类型,以泛化 或持续存在的焦虑为主要临床表现,常伴有自主神经功能 紊乱及运动不安的症状1。中医学认为心脾两虚、肝郁化 火和心肾不交是GAD的主要证型2。随着现代生活节奏 的加快,工作生活压力的加大,GAD证型逐步由肝郁化火 向心阴亏虚转变3。近年来,众多学者4-6聚焦于中医药 zhi疗GAD的多靶点整体作用优势,相继报道了中药、针灸、 推拿等对GAD的zhi疗效果。但是,关于中医药zhi疗GAD 的具体作用机制仍不清楚7。中医诊疗讲究对ji病进行 辨证论治,但目前关于GAD的病证结合动物模型还不够成 熟,由于缺乏机制研究的载体,所以影响了 GAD的中医应 用基础研究进步开展8。因此,建立稳定的、可重复的、 符合中医病因bin机的GAD病证结合动物模型十分必要。 病证结合既是一种理论,也是一种方法,体现了现代中医 “据病言证,究证言法,法随证立,方证相应”的诊疗思 路9。病证结合动物模型[10 ,是基于中医药理论指导,结 合现代医学理论与实验动物科学知识,采用中医学病因复 制证候动物模型,通过现代医学病因复制ji病动物模型,令 模型同时具有ji病与证候特征的一类造模方法。本研究根 据病证结合理论,采用不确定性空瓶应激法[11]建立GAD ji病模型,结合水环境小站台睡眠剥夺法[12造成心阴亏虚 证候模型,zui终构建了 GAD心阴亏虚病证结合模型,并从 宏观表征、微观指标、以方验证(天王补心丸三个角度评 价了该模型

结果显示:①行为学:与模型组比较,天王补心丸组、di西泮片组干预后各时间点OE%值、OT%值、水平运动、垂 直运动均升高P〇.〇5);di西泮片组干预后各时间点 OE%值、干预第1、周末OT%值、各时间点水平运动和干 预第1、周末垂直运动均升高P<0. 01)。②生命体征: 干预第3周末,与模型组比较,天王补心丸组、di西泮片组 收缩压均升高(P 0. 05),心率、呼吸、肛温均降低(P 0. 05)。③RT - PCR:干预第3周末,与模型组比较,天王补 心丸组、di西泮片组大鼠海马GR mRNA表达水平均升高 (P <0.05)。结果说明天王补心丸明显改善了模型中GAD 心阴亏虚大鼠的焦虑症状及心阴亏虚状况。中医学有‘‘方 证相应”之说,方证相应强调了方剂与其作用对象之间的 相互作用,即方剂的功用是特定方药与其作用对象特定证 之间相互作用的结果26 ,故通过‘‘以方验证”的方式可以 反证证候模型是否构建成功。天王补心丸为中医经典名 方,具有滋阴养血、补心an神等功效,主要用于心阴不足,心 悸健忘,shi眠多梦等症,是zhi疗GAD心阴亏虚证的代表性 方药27-28。已有临床研究29证实,采用天王补心汤zhi疗 心阴不足型GAD可以达到和西药同样的抗焦虑效果。本 研究结果表明天王补心丸对GAD心阴亏虚大鼠的焦虑行 为及心阴亏虚表现均有明显改善作用。故从‘‘方证相关, 以方验证”的评价角度证实了本实验模型的稳定性和可靠 性。同时,本研究结果也说明了天王补心丸在干预zhi疗 GAD心阴亏虚大鼠时,主要通过增加大鼠海马组织内GR mRNA表达量以发挥抗焦虑作用。由此可知,病证方药紧 密联系,病证结合、方证相应,天王补心丸切实地对GAD心 阴亏虚大鼠病证结合模型进行了验证和评价。

5结论

本研究采用不确定性空瓶应激法结合水环境小站台睡 眠剥夺法构建了 GAD心阴亏虚病证结合模型,并且从宏观 表征、微观指标、以方验证(天王补心丸)3个角度对模型进 行了评价。结果表明,模型稳定、相对可控、造模理念符合 中医病因bin机,值得推广应用。受实验条件限制,本模型的 微观指标相对较少,有待进一步研究。

沪公网安备 31011202007432号