关键词： 小鼠明暗穿箱实验

目的：本操作规程是关于利用小鼠明暗穿箱实验对受试物的抗焦虑活性进行药理学评价的具体操作规程。

背景知识：无

原理：动物置于明箱中央，背朝隔板。暗箱红灯不通电，明箱白炽灯照明。造成动物焦虑。

主体内容（操作步骤）：

实验的准备

实验的器材、仪器、药品

仪器：分析天平，摄像仪，录像机，监视器，小鼠明暗箱（为一个上面敞开的箱子(45cm×27cm×27cm,上海欣软信息科技有限公司提供),内部分为明箱和暗箱，明箱占箱子的3/5，暗箱占2/5，有一个高出箱壁20cm的隔板分开，隔板的底部开一个7.5cm×7.5cm的方口。明箱内涂成白色，由一个60W的白纸灯泡照明，灯泡高出箱子17cm.暗箱内涂成黑色，上方17cm置一个不通电的红色灯泡。箱子底部划上边长9cm的方格。）。

器材：红灯（25W），白炽灯（60W）秒表。 

药品：受试药、阳性对照药。

实验动物

使用昆明种小鼠，雄性，体重范围在18~22g之间。饲养于12h一个循环的反向明暗转换的环境中（7am关灯）10d。实验开始前5-7d每天抚摸动物1-2min，减少无关刺激对实验的影响。对一般体征进行观察，选用健康状况良好的动物供实验使用。

溶媒的配制

根据受试物的性质选择适当溶媒，配制后在容器标签上记录名称、使用期限、配制日期、配制人。

受试物及阳性对照物的配制

实验当日给药前将受试物及阳性对照物用溶媒充分溶解或混悬，根据给药剂量及给药容积配制成所需浓度的均匀的溶液或混悬液。

阴性对照物

原则上以配制受试物及阳性对照物时使用的溶媒作为阴性对照物。

实验操作规程（附加资料I）

1 分组 将小鼠称重后记录体重，按体重随机分组，每组10只。

2 给药 经口给药,给药容积为0.1-0.2ml/10g，各组实验动物的测试呈正反交替顺序进行，记录给药时间。

3 致焦虑 给药适当时间后，将小鼠置于明箱中央，背朝隔板。实验于10am至2pm安静环境下进行，暗箱红灯不通电，明箱白炽灯照明。每只小鼠测试后迷路用湿海绵彻底清洗并擦干。

4 记录实验过程 通过明暗箱上方的摄像机及与隔壁房间相连的监视器和录像机观察和记录5min内小鼠的活动情况。

5 数据读取 由不知情的熟练实验人员观看实验录像带，分别记录小鼠穿箱次数、在明箱停留的时间及总穿格次数。

结果判定

1 穿箱次数

穿箱次数以平均值标准差表示。

2 明箱停留时间

明箱停留时间以平均值标准差表示。

3 总穿格次数

总穿格次数以平均值±标准差表示。

数据统计方法

在对照组和给药组之间以穿箱次数、明箱停留的时间及总穿格次数分别进行Student’s t检验，判断给药后有无显著性差异。

参考文献（附加资料II）Nicholas M. Barnes, Celine H.K.Cheng, et al: Prpfiles of interaction of R(+)/S(-)-zacopride and anxiolytic agents in a mouse model. European Journal of Pharcology,218(1992):91-100

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